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熒光素的五大類,你知道幾個(gè)

  • 發(fā)布日期:2021-06-24      瀏覽次數(shù):1619
    •   熒光素的五大類,你知道幾個(gè)
        1、熒光蛋白
        熒光蛋白又可以分為兩組:
        第一組蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)編碼了熒光。這些熒光蛋白包括綠色熒光蛋白(GFP)、YFP、RFP和各種衍生物。這些熒光蛋白可以克隆到研究者最喜歡的靶標(biāo)載體中,并通過使用該熒光蛋白來跟蹤靶標(biāo)的表達(dá)。
        第二類熒光蛋白是衍生自在藻類和植物中發(fā)現(xiàn)的藻膽蛋白的那些。這些蛋白質(zhì)使用藻膽蛋白輔因子來吸收光能,包括藻紅蛋白(PE)、別藻藍(lán)蛋白(APC)和紫草素葉綠素(PerCP)。植物素蛋白,尤其是PE,是研究人員目前可獲得的最亮的熒光分子(下圖為藻紅蛋白及其輔因子的結(jié)構(gòu))。
        應(yīng)該注意的是,雖然這些分子在流式細(xì)胞術(shù)中表現(xiàn)非常好,但是不太適用于熒光顯微鏡,因?yàn)樗鼈儠?huì)被快速淬滅。
        2、合成類小分子
        合成類分子熒光素是在流式細(xì)胞術(shù)中具有悠久歷史的廣泛類型的相對(duì)較小的熒光化合物。
        這些分子在環(huán)、鏈或其組合中都含有至少一個(gè)共軛雙鍵體系,在受光激發(fā)時(shí)發(fā)生改變(參見下圖,F(xiàn)ITC和Cy5的結(jié)構(gòu))。
        合成染料可覆蓋整個(gè)光譜,并可通過不同配置改變其溶解度和細(xì)胞通透能力。
        3、量子點(diǎn)
        在二十世紀(jì)末期,量子點(diǎn)(QDots)染料漸漸開始普及。QDot是一種半導(dǎo)體,可以根據(jù)粒子的尺寸調(diào)整其不同的發(fā)射波長(zhǎng)(參見下圖的QDot熒光圖)。
        這些QDots具有亮度高、光穩(wěn)定性好,但由于在流式細(xì)胞術(shù)中,QDots通常被紫激光激發(fā),所以可能影響了其普及性。盡管Qdot也可以被低于發(fā)射光最大值的激光激發(fā),但設(shè)計(jì)方案時(shí)還是需要注意。
        4、聚合物染料
        聚合物染料由Sirigen開發(fā),亮度高,主要是紫光和紫外光激發(fā)(BV系列和BUV系列),還有藍(lán)光激發(fā)的系列(Brilliant Blue)。
        5、串聯(lián)染料
        串聯(lián)染料是利用F?rster共振能量轉(zhuǎn)移(稱為FRET或熒光共振能量轉(zhuǎn)移)原理的特殊類別的熒光分子。
        在這個(gè)過程中,兩個(gè)熒光染料在位置上非常近。 供體分子的發(fā)射光必須與受體分子的激發(fā)光波長(zhǎng)重疊。
        當(dāng)供體分子被激發(fā)時(shí),電子被促進(jìn)到更高的能量狀態(tài),并將能量轉(zhuǎn)移到受體分子,其本身則返回到基態(tài),從而產(chǎn)生另一種波長(zhǎng)的光子。
        了解了染料的種類及其原理,對(duì)于我們挑選染料還是有一定幫助的。

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